Wir empfehlen, den Antikörper immer wie im Datenblatt angegeben aufzubewahren. Wir können nicht garantieren, wie sich der Antikörper verhält, wenn er unter anderen Bedingungen gelagert wird.
Die Größe der Aliquots hängt davon ab, wie viel man normalerweise in einem Experiment verwendet. Die Aliquots sollten nicht kleiner als 10 µl sein. Je kleiner das Aliquot ist, desto stärker wird die Konzentration durch Verdampfung und Adsorption des Antikörpers auf der Oberfläche des Fläschchens beeinflusst.
Viele unserer Antikörper haben Verdünnungsanweisungen auf ihren Datenblättern. In diesen Fällen empfehlen wir, diese Anweisungen zu befolgen. Für Antikörper ohne empfohlene Verdünnungen empfehlen wir die Verwendung der folgenden Tabelle, um eine Anfangsverdünnung zu bestimmen.
| Gewebekulturüberstand | Aszites | Ganzes Antiserum | Gereinigter Antikörper | |
|---|---|---|---|---|
| WB / DB | 1/100 | 1/1,000 | 1/500 | 1 µg/ml |
| FC | 1/100 | 1/1,000 | 1/500 | 1 µg/ml |
| ELISA | 1/1,000 | 1/10,000 | 1/500 | 0.1 µg/ml |
| IHC / ICC | Neat - 1/10 | 1/100 | 1/50 - 1/100 | 5 µg/ml |
| IP | --- | 1/100 | 1/50 - 1/100 | 1-10 µg/ml |
Die meisten ungereinigten Antikörper (d. H. Ganzes Antiserum, Kulturüberstand oder Aszitesflüssigkeit) haben keine auf ihren Datenblättern angegebene Konzentration - da diese nicht bestimmt wurde. Diese Antikörper können in spezifischen Antikörperkonzentrationen signifikant variieren. Als grobe Konzentrationsschätzung enthält der Gewebekulturüberstand 1-3 mg / ml, Aszites 5-10 mg / ml und das gesamte Antiserum 1-10 mg / ml.
Es ist wichtig zu beachten, dass die Verdünnungen / Konzentrationen in der obigen Tabelle lediglich als Ausgangspunkt empfohlen werden. Es kann erforderlich sein, die Verdünnung / Konzentration basierend auf experimentellen Ergebnissen anzupassen.
Wir listen alle Spezies und Anwendungen, von denen wir wissen, dass ein Antikörper validiert wird, im Datenblatt auf.
Wir können nicht garantieren, dass ein Antikörper in einer nicht getesteten Spezies funktioniert, selbst wenn das Sequenz-Alignment hoch ist, da es viele Variablen gibt, die bestimmen, ob ein Antikörper in einer anderen Spezies bindet.
Wenn für den Antikörper Kreuzreaktivitätsdaten verfügbar sind, werden diese im Datenblatt unter den Überschriften "Spezifität" und "Kreuzreaktivität" angezeigt. Wenn keine Daten zur Kreuzreaktivität verfügbar sind, empfehlen wir, die Sequenzalignment des Immunogens mit der Isoform oder den anderen Proteinen zu überprüfen, an denen Sie interessiert sind.
Ein Online-Tool zur Berechnung des Prozentsatzes der Sequenzalignment finden Sie auf der Website des EMBL-EBI. Sie müssen eine Kopie der Immunogensequenz des Antikörpers nehmen und sie mit der Proteinsequenz der Spezies ausrichten, die Sie testen möchten. Wir empfehlen einen Alignment-Score von mehr als 85% als guten Hinweis darauf, dass ein Antikörper kreuzreagieren kann. Wir empfehlen, dass der Alignment-Score viel niedriger als 85% ist, um anzuzeigen, dass keine Kreuzreaktivität vorliegen sollte.
Jede Klonnummer repräsentiert eine spezifische Zelllinie, die aus Aszites kloniert wurde und zur Herstellung des Antikörpers verwendet wurde. Da monoklonale Antikörper von mehr als einem Wirt und mehr als einer Zelllinie produziert werden, erhält jede klonierte Zelllinie eine eindeutige Klonnummer, um sie zu identifizieren.
Wir listen alle Publikationen, dass wir bewusst in die ‚Citation‘ Tabs sind. Wir empfehlen, auch CiteAb zu überprüfen, um festzustellen, ob für ein bestimmtes Produkt zusätzliche Zitate vorhanden sind.
Isotypkontrollen werden verwendet, um zu bestätigen, dass die Bindung des primären Antikörpers spezifisch ist und nicht ein Ergebnis anderer Proteininteraktionen oder einer unspezifischen Fc-Rezeptorbindung ist.
Der Isotyp-Kontrollantikörper sollte mit den Wirtsspezies, dem Isotyp und der Konjugation der Primärantikörper übereinstimmen. Wenn der primäre Antikörper beispielsweise HRP-konjugiertes Ratten-IgG1 ist, benötigen Sie eine HRP-konjugierte Ratten-IgG1-Isotypkontrolle.
Wir empfehlen, zuerst das Datenblatt zu überprüfen, das häufig eine vorgeschlagene Positivkontrolle enthält. Es ist wichtig sicherzustellen, dass das verwendete Gewebe oder die verwendete Zelllinie von einer getesteten Spezies stammt.
Wenn keine positiven Kontrollen vorgeschlagen werden, empfehlen wir, die UniProt-Website zu besuchen. Diese Datenbank enthält häufig eine Liste von Geweben, in denen das Protein exprimiert wird. Diese Gewebe können als geeignete Positivkontrollen angesehen werden.
Sekundärantikörper sollten gegen die Wirtsspezies des von Ihnen verwendeten Primärantikörpers erzeugt werden. Wenn Ihr primärer Antikörper beispielsweise ein monoklonaler Rattenantikörper ist, benötigen Sie einen sekundären Anti-Ratten-Antikörper. Wir empfehlen, das Datenblatt des sekundären Antikörpers zu überprüfen, um sicherzustellen, dass er in der von Ihnen verwendeten Anwendung validiert wurde.
Die Datenblätter enthalten die aktuellsten verfügbaren Informationen zu einem Produkt. Wenn wir zusätzliche Informationen finden, werden die Datenblätter sofort aktualisiert, sodass sie niemals veraltet sein sollten.